Imunização de camundongos LDLr-/- com peptídeo mimético da LDL eletronegativa: uma potencial estratégia terapêutica para a ateroscleros / Immunization of LDLr - / - mice with electronegative LDL mimetic peptides: a potential therapeutic strategy for atherosclerosis

Introdução: A aterosclerose é uma doença inflamatória crônica decorrente de alterações na parede das artérias de médio e grande calibre e associadas a diversos fatores de risco, dentre os quais destaca-se as hiperlipidemias, ou seja, o aumento plasmático das lipoproteínas, mas também outras comorbidades, como a Síndrome Metabólica. Entre as lipoproteínas, a lipoproteína de baixa densidade (LDL) é de grande relevância na aterosclerose. Diferentes espécies de LDL modificada (LDLm) são originadas através de lipólise, glicação e proteólise, além da oxidação, variando em densidade e eletronegatividade, sendo melhor denominada LDL eletronegativa [LDL (-)]. Considerando as diferenças conformacionais entre a estrutura da ApoB-100 da LDL nativa e da LDL (-), em um estudo inicial, nosso grupo desenvolveu um anticorpo monoclonal (2C7) a partir da imunização de camundongos Balb/c com a LDL (-) humana. Em uma etapa seguinte foi mapeado o epítopo reconhecido pelo anticorpo monoclonal anti-LDL (-) através de phage display. O peptídeo ligante do anticorpo monoclonal anti-LDL (-) foi nomeado p2C7. Esse peptídeo não representa regiões da sequência linear da ApoB-100 humana, mas microdomínios conformacionais de epítopos da ApoB-100 da LDL (-), tornando-os candidatos para a imunomodulação da aterogênese. Portanto, investigar a imunomodulação induzida pelos peptídeo p2C7 miméticos da LDL (-), por representar um epítopo imunodominante da LDL (-), poderá abrir novas perspectivas terapêuticas futuras para a imunomodulação da aterosclerose. Objetivo: Avaliar a imunomodulação promovida pelo p2C7 in vivo, utilizando camundongos C57BL/6 LDLr -/- e amostras de plasma humano. Adicionalmente, no estágio (BEPE) realizado no Instituto Karolinska (dezembro de 2019 a março de 2021), investigou-se o imunometabolismo como mediador nas doenças cardiovasculares. Na parte II-A, estão descritos os resultados do estudo inicialmente proposto. Na parte II-B, apresenta-se os resultados que foram desenvolvidos posteriormente, com ampliação do escopo do projeto, abordando-se a inflamação vascular envolvida no aneurisma de aorta abdominal através de ferramentas de bioinformática. Na parte II-C, são apresentados os resultados do estudo do envolvimento da enzima indolamina 2,3 dioxigenase (IDO) na esteatohepatite não-alcoólica (NASH) e aterosclerose em camundongos ApoE-/- and ApoE/IDO/double-knockout. Metodologia: Foi avaliada a presença de anticorpos anti-p2C7 em amostras de plasma humano de indivíduos com ou sem síndrome metabólica. Realizamos a determinação de TNF circulante nas mesmas amostras e prosseguimos com regressões lineares associando os parâmetros inflamatórios com os níveis de anticorpos anti-p2C7. Camundongos C57BL/6 LDLr -/- foram imunizados com p2C7 e os adjuvantes Alum ou Montanide ISA 720, analisando-se os títulos de anticorpos contra p2C7 e LDL (-), a produção de citocinas (IL-10, IL-4, IL-2, IL-6, IFNγ, IL-17, TNFα) e células secretoras de anticorpos. Camundongos C57BL/6 LDLr -/- foram tolerizados contra os peptídeos mimotopos, com injeções intravenosas (veia caudal) e desafiados com a imunização contendo LDL (-) + Alum. Avaliou-se os títulos de anticorpos contra p2C7 e LDL (-) e a produção de citocinas (TNF-α, IFNγ, IL-12, IL-6, IL-10 e MCP-1). Os camundongos foram mantidos em dieta hipercolesterolêmica por 3 meses para formação da placa aterosclerótica. Após este período, os camundongos foram eutanasiados, avaliando-se a formação de placa aterosclerótica na artéria abdominal e arco aórtico, assim como a produção de citocinas (TNF-α, IFNγ, IL-12, IL-6, IL-10 e MCP-1). Camundongos C57BL/6 LDLr -/- foram imunizados com OVA-p2C7 e, após dieta hipercolesterolêmica de 3 meses para formação de placa aterosclerótica, foram avaliados os parâmetros inflamatórios e avaliada a captação de 18F-FDG no arco aórtico através de PET/CT. Resultados: A imunização com o p2C7 (livre) não foi capaz de induzir resposta humoral, não se observando títulos detectáveis de anticorpos reativos à p2C7 ou LDL (-) em nenhum camundongo imunizado, assim como não foram detectadas células secretoras de anticorpos específicos para a LDL (-). O grupo imunizado com Alum ou Montanide + p2C7 teve aumento significativo na produção de TNF- quando comparado com os demais grupos. O protocolo de tolerização foi realizado com sucesso, visto que os camundongos tolerizados apresentaram títulos de anticorpos inferiores aos controles para o epítopo utilizado. Apenas os camundongos tolerizados com o p2C7 apresentaram aumento significativo na produção de IL-6, IL-12, IL-10, TNF-α, IFNγ e MCP 1 após dieta hipercolesterolêmica. A imunização ativa com OVA-p2C7 foi capaz de reduzir a produção de TNF induzida pela dieta hipercolesterolêmica, assim como reduzir a captação de 18F-FDG. Conclusão: o epítopo p2C7 é altamente expresso na LDL (-) de pacientes com maior risco cardiovascular. Além disso, a imunização ativa com p2C7 também se mostra uma ferramenta promissora para prevenir e regular a inflamação causada pela LDL (-) no curso da aterosclerose

Introduction: Atherosclerosis is a chronic inflammatory disease resulting from changes in the wall of medium and large-caliber arteries and associated with several risk factors, among which hyperlipidemias stand out, ie, the increase in plasma lipoproteins, but also other comorbidities, such as Metabolic Syndrome. Among the lipoproteins, low-density lipoprotein (LDL) is of great relevance in atherosclerosis. Different isoforms of modified LDL (LDLm) are originated through lipolysis, glycation and proteolysis, in addition to oxidation, varying in density and electronegativity, being better called electronegative LDL [LDL (-)]. Considering the conformational differences between the ApoB-100 structure of native LDL and LDL (-), in an initial study, our group developed a monoclonal antibody (2C7) from the immunization of Balb/c mice with human LDL (-). In a next step, the epitope recognized by the anti-LDL monoclonal antibody (-) was mapped using phage display. The binding peptide of anti-LDL monoclonal antibodies (-) was named p2C7. This peptide does not represent linear sequence regions of human ApoB-100, but conformational microdomains of LDL (-) ApoB-100 epitopes, making them candidates for the immunomodulation of atherogenesis. Therefore, investigating the immunomodulation induced by p2C7 peptide mimetics of LDL (-) as it represents an immunodominant epitope of LDL (-) could open new future therapeutic perspectives for the immunomodulation of atherosclerosis. Objective: To evaluate the immunomodulation promoted by p2C7 in vivo, using C57BL/6 LDLr -/- mice, and human plasma samples. In addition, in the internship (BEPE), held at the Karolinska Institute (December 2019 to March 2021), immunometabolism as a mediator of Cardiovascular Diseases was studied. In part II-A, the results of the initially proposed study are described. In part II-B, the results that were developed later are presented, expanding the scope of the project, approaching the vascular inflammation involved in the abdominal aortic aneurysm through bioinformatics tools. In part II-C, the results of the study of the involvement of the enzyme indoleamine 2,3 dioxygenase (IDO) in non-alcoholic steatohepatitis (NASH) and atherosclerosis in ApoE-/- and ApoE/IDO/double mice are presented -knockout. Methodology: The presence of anti-p2C7 antibodies in human plasma samples with or without Metabolic Syndrome was evaluated. We measured circulating TNF in the same samples and proceeded with linear regressions associating inflammatory parameters with levels of anti-p2C7 antibodies. C57BL/6 LDLr -/- mice were immunized with p2C7 and the adjuvants Alum or Montanide ISA 720, analyzing the antibody titers against p2C7 and LDL (-), the production of cytokines (IL-10, IL-4, IL -2, IL-6, IFNγ, IL-17, TNFα) and antibody-secreting cells. C57BL/6 LDLr -/- mice were tolerized against mimotope peptides with intravenous injections (caudal vein) and challenged with immunization containing LDL (-) + Alum. Antibody titers against p2C7 and LDL (-) and cytokine production (TNF-α, IFNγ, IL-12, IL-6, IL-10 and MCP-1) were evaluated. The mice were kept on a hypercholesterolemic diet for 3 months for atherosclerotic plaque formation. After this period, the mice were euthanized, evaluating the formation of atherosclerotic plaque in the abdominal artery and aortic arch, as well as the production of cytokines (TNF-α, IFNγ, IL-12, IL-6, IL-10 and MCP -1). C57BL/6 LDLr -/- mice were immunized with OVA-p2C7 and, after a 3-month hypercholesterolemic diet for atherosclerotic plaque formation, inflammatory parameters were evaluated and 18F-FDG uptake was evaluated by PET/CT. Results: Immunization with p2C7 (free) was not able to induce a humoral response, with no detectable titers of antibodies reactive to p2C7 or LDL (-) being observed in any immunized mouse, as well as no detectable antibody-secreting cells for the LDL (-). The group immunized with Alum or Montanide + p2C7 had a significant increase in TNF-α production when compared to the other groups. The tolerance protocol was successfully performed, as the tolerized mice had lower antibody titers than controls for the epitope used. Only mice tolerated with p2C7 showed a significant increase in the production of IL-6, IL-12, IL-10, TNF-α, IFNγ and MCP 1 after a hypercholesterolemic diet. Active immunization with OVA-p2C7 was able to reduce TNF production induced by the hypercholesterolemic diet, as well as to reduce 18F-FDG uptake. Conclusion: the p2C7 epitope is highly expressed in LDL (-) of patients with higher cardiovascular risk. Furthermore, active immunization with p2C7 is also a promising tool to prevent and regulate inflammation caused by LDL (-) in the course of atherosclerosis

Two cases of renal cell cancer during immunobiologic therapy for psoriasis

Immunobiologic therapy is indicated for severe forms of psoriasis, resistant to conventional therapy. There is growing concern about their safety profile and possible association with cancer development. This article documents two cases of renal cell cancer during treatment with biologic therapy, reviewing what is described in the literature . The risk of solid tumors as a complication of using TNF-alpha inhibitors is controversial. No conclusion can be drawn from the data in the literature, however, we believe that special attention should be given to those with known risk factors for a specific neoplasm.

The skin tissue is adversely affected by TNF-alpha blockers in patients with chronic inflammatory arthritis: a 5-year prospective analysis

OBJECTIVE: We evaluated the incidence of and the main risk factors associated with cutaneous adverse events in patients with chronic inflammatory arthritis following anti-TNF-α therapy. METHODS: A total of 257 patients with active arthritis who were taking TNF-α blockers, including 158 patients with rheumatoid arthritis, 87 with ankylosing spondylitis and 12 with psoriatic arthritis, were enrolled in a 5-year prospective analysis. Patients with overlapping or other rheumatic diseases were excluded. Anthropometric, socioeconomic, demographic and clinical data were evaluated, including the Disease Activity Score-28, Bath Ankylosing Spondylitis Disease Activity Index and Psoriasis Area Severity Index. Skin conditions were evaluated by two dermatology experts, and in doubtful cases, skin lesion biopsies were performed. Associations between adverse cutaneous events and clinical, demographic and epidemiological variables were determined using the chi-square test, and logistic regression analyses were performed to identify risk factors. The significance level was set at p<0.05. RESULTS: After 60 months of follow-up, 71 adverse events (73.85/1000 patient-years) were observed, of which allergic and immune-mediated phenomena were the most frequent events, followed by infectious conditions involving bacterial (47.1%), parasitic (23.5%), fungal (20.6%) and viral (8.8%) agents. CONCLUSION: The skin is significantly affected by adverse reactions resulting from the use of TNF-α blockers, and the main risk factors for cutaneous events were advanced age, female sex, a diagnosis of rheumatoid arthritis, disease activity and the use of infliximab. .

Uso de infliximabe em paciente com artrite reumatoide e hepatite B crônica / Use of infliximab in a patient with rheumatoid arthritis and chronic hepatitis B

Os agentes anti-TNF-α emergiram como potente tratamento para os pacientes com artrite reumatoide que não respondem às drogas modificadoras de doença convencionais. Por induzir à imunossupressão, essas drogas têm como principal complicação o aumento da suscetibilidade a várias infecções. A reativação do vírus da hepatite B (HBV) é um dos efeitos colaterais mais preocupantes em pacientes recebendo agentes anti-TNF-α com infecção pelo HBV. Descrevemos o caso de um paciente de 56 anos com quadro de hepatite B estável, com boa resposta à associação dos antivirais lamivudina e tenofovir quando iniciou infliximabe. O paciente obteve boa resposta ao anti-TNF-α , atingindo remissão da doença. Durante os 30 meses de tratamento com o biológico, manteve função hepática estável, sem reativação do HBV.

Anti-TNF-α agents have emerged as a potent treatment for patients with rheumatoid arthritis unresponsive to conventional disease-modifying antirheumatic drugs. Increased susceptibility to infections induced by these drugs is the main complication of their use. Reactivation of hepatitis B virus (HBV) is one of the most worrisome side effects in patients with HBV infection receiving anti-TNF-α. We report the case of a 56-year-old male patient with stable hepatitis B and good response to the antiviral combination of lamivudine and tenofovir when infliximab was started. The patient went into remission. During the 30-month treatment with the biologic, his liver function remained stable, with no HBV reactivation.

Oclusão de ramo venoso da retina associado ao uso de infliximabe: relato de caso / Branch retinal vein occlusion following infliximab treatment: case report

Descrevemos o caso de uma paciente, de 53 anos, com quadro de oclusão de ramo venoso da retina após receber seis infusões de infliximabe (3 mg/kg/dose), para tratamento de artrite reumatóide. A investigação clínica e laboratorial sobre distúrbios de coagulação, cardiopatias e sinais de hipertensão arterial crônica foi negativa. A relação temporal do uso de infliximabe e o desenvolvimento do quadro de oclusão de ramo pode indicar um possível efeito adverso da medicação.

A case of a 53 year-old female patient who developed branch retinal vein occlusion after six 3 mg/kg Infliximab infusions for rheumatoid arthritis treatment is reported. Hematological disorders, cardiopathy and chronic systemic hypertension evaluation were negative. The relationship between the infliximab therapy and the development of retinal vein occlusion raises awareness of the possibility of a potential side effect of this medication.

Psoríase moderada a grave tratada com infliximabe em 53 pacientes: perfil dos pacientes, eficácia e efeitos adversos / Moderate to severe psoriasis treated with infliximab - 53 patients: patients profile, efficacy and adverse effects

FUNDAMENTOS: A psoríase leva a um impacto negativo significativo na qualidade de vida e está associada a comorbidades. A atividade inflamatória das placas psoríacas se inicia, em parte, pela ativação de linfócitos Th1, que liberam citocinas pró-inflamatórias, como TNF alfa. Infliximabe neutraliza a atividade biológica do TNF alfa. Reações adversas que ocorrem durante a infusão e até 24 horas após são chamadas de agudas. Reações tardias ocorrem entre 24 horas e 14 dias após infusão. OBJETIVO: Avaliar o perfil dos pacientes com psoríase moderada a grave e resistente ao tratamento convencional, bem como as reações adversas ao infliximabe. MÉTODO: Foram tratados com infliximabe 53 pacientes: 40 homens e 13 mulheres. A dose utilizada foi 5 mg/kg nas semanas 0, 2 e 6 (fase de indução), seguida da fase de manutenção a cada oito semanas. RESULTADO: Dentre os 53 pacientes, seis se submeteram apenas à fase de indução, obtiveram Pasi 90-100 e não receberam mais a droga. Quarenta e sete pacientes continuaram recebendo a medicação por pelo menos dois, três anos. Deles, 55,3 por cento (26) apresentaram algum efeito adverso. Os efeitos adversos precoces foram observados em 34 por cento dos pacientes, e os tardios, em 36,1 por cento dos pacientes. Foi encontrada uma prevalência de 57,4 por cento de comorbidades nesses pacientes. CONCLUSÃO: O infliximabe mostrou-se seguro e eficaz no presente estudo. Dentre as comorbidades associadas aos pacientes neste estudo, a obesidade se relacionou com uma resposta mais tardia e menos eficiente. Efeitos adversos precoces e tardios, quando bem monitorados, não impedem a manutenção da terapêutica e não expõem os pacientes a riscos não controlados.

BACKGROUND: Psoriasis exerts a significant negative effect on quality of life and is associated with comorbidities. The inflammatory activity of the psoriasis plaques is partially triggered by activation of the Th1 lymphocytes, which release proinflammatory cytokines such as TNF-alpha. Infliximab neutralizes the biological activity of TNF-alpha. Adverse reactions that occur during infusion or up to 24 hours afterwards are referred to as acute reactions. Delayed reactions are those occurring between 24 hours and 14 days after an infusion. OBJECTIVE: To evaluate the profile of patients with moderate to severe psoriasis that is resistant to conventional treatment, and to assess adverse reactions to infliximab. METHODS: Fifty-three patients, 40 men and 13 women, were treated with infliximab. The dose used was 5 mg/kg in weeks 0, 2 and 6 (induction phase), followed by maintenance therapy every 8 weeks. RESULTS: Of the 53 patients, 6 participated only in the induction phase. These patients reached Psoriasis Area Severity Index (PASI) of 90-100 and opted to discontinue treatment. Forty-seven patients continued therapy with the drug for at least 2-3 years. Of these, 55.3 percent (n=26) experienced some type of adverse event. Acute adverse events were recorded in 34 percent of the patients and delayed adverse events in 36.1 percent. The prevalence of comorbidities was 57.4 percent. CONCLUSION: In the present study, infliximab was found to constitute a safe and effective form of therapy. Of the comorbidities recorded in the patients in this study, obesity was associated with a delayed and less effective response to treatment. When adequately monitored, neither acute nor delayed adverse events require discontinuation of therapy, since they do not represent an uncontrolled risk to the patient.

Tuberculose esplênica durante tratamento de psoríase com infliximabe / Splenic tuberculosis during psoriasis treatment with infliximab

A psoríase é doença crônica que afeta a pele e, eventualmente, as articulações. A terapia biológica age bloqueando citocinas inflamatórias implicadas na patogênese da doença, dentre elas o fator de necrose tumoral alfa. Este também tem papel na defesa do hospedeiro contra o Mycobacterium tuberculosis. Relata-se um caso de psoríase com boa resposta ao infliximabe, porém com desenvolvimento de tuberculose esplênica durante o tratamento.

Psoriasis is a chronic inflammatory disease affecting the skin and occasionally the joints. The biological agents have been engineered to target a specific step in the inflammatory cascade that leads to psoriasis, including tumor necrosis factor, which has a central role in the host defense against Mycobacterium tuberculosis. This is a case report about a psoriatic patient who presented splenic tuberculosis during treatment with infliximab.